Nimpf VO [30. 10. 2008] funktionelles vs. positionelles Klonieren * funktionell: Krankheit - Funktion - Gen - (Karte) * positionell: Krankheit - Genkarte - Gen - (Funktion) "neues" Konzept: Krankheit -> Mapping -> Gene zystische Fibrose AR, 1:2000, 1:25 heterozygot generalisierte Dysfunktion exokriner Druesen Mutation im CFTR-Gen (CF transmembrane conductance regulator) grobes Konzept: * Familie mit bestimmbarem Phaenotyp einer Erkrankung * genetischer Marker: Identifizierung d. Gene ** Grob-Mapping: Teil eines Arm eines Chromosoms ... (YAC/BAC-Klonierung) genetisches Mapping: # KandidatInnenregion definieren (Linkage-Analysen aus Pop. m. selber "Founder Family") # Klone der Region anfertigen # alle Gene in der Reg. ident. # fuer Mutationsscreening priorisieren # KandidatInnengene auf Mut. bei Personen testen ==KandidatInnenregion definieren== Linkage-Analysen aus Pop. m. selber "Founder Family" Autozygosity mapping m. blutsverw. Fam. Wiederholung: * Polymorphe Marker (VNTR, SNP (RFLP rep. frag. length polym.)): ab 1989 ~ 10000 VNTR bekannt - Vorteil: viele Allele - hoch informativ! Ghost-Banden 4 x 10E6 RFLP bekannt und positioniert PCR-Produkt mit Enzym schneiden (Restriktionendonukl.) an SNP -> Allelunterscheidung Meiose: Anlagerung - Crossing over (Hybridchromosomen) untersch. Chromosomen: unabhaengige Vererbung selbes Chromosom: Rekombination zwischen zwei definierten Loci gemeinsame Vererbung -> Bestimmung der Entfernung (cM) % Rekomb = (Zahl d. rekomb. Nachkommen) / (Geamtzahl d. Nachkommen) Hot spots der Rekombination: genetische Karte != physikalische Karte (Haeufigkeit d. Rekombination unterschiedlich) abhaengig von Rekombination bei Meiose zur Eizelle/Samenzelle -> 1 cM in manchen Bereichen 10 Mio, in anderen 500k ... CF: erster Erfolg 70 % eine Mutation, Rest 45 Mutationen CTT-Deletion (Verlust eines Phe) - cDNA bleibt in Frame! vollstaendige Funktion erhalten, aber andere Faltung -> Kontrollapparat im Golgi-Apparat verursacht Abbau ABC-Transporter (mehrere Membrandurchgaenge) - Cl- Kanal